高脂血癥為臨床上的多發(fā)病及常見病，是引發(fā) 脂肪肝、心腦血管疾病的重要病因之一，中醫(yī) 藥在防治該疾病上具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，可多靶點(diǎn)、多環(huán) 節(jié)綜合降脂，而且毒副作用小，相關(guān)中藥或保健食 品市場(chǎng)前景良好。

六味葛藍(lán)降脂片是由廣西中醫(yī)藥大學(xué)制藥廠擬 開發(fā)的具有輔助降血脂功效的保健食品，由絞股 藍(lán)、火麻仁、決明子、葛根、沙棘、荷葉 6 味藥食 兩用藥材配伍而成，通過(guò)扶正祛邪、補(bǔ)中益氣來(lái)調(diào) 節(jié)機(jī)體代謝機(jī)能，從而達(dá)到降血脂作用。方中 葛根和決明子發(fā)揮主要作用，前者所含異黃酮是重 要藥效物質(zhì)，葛根素、大豆苷、大豆苷元等具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈血管、增加冠狀動(dòng)脈血流量作 用，同時(shí)可降血脂; 后者具有降血脂、降血 壓等療效，可抑制血清膽固醇，以降血脂效果更顯 著，其主要有效成分為蒽醌，代表性成分 有橙黃決明素、大黃酚，為瀉下、降血脂作用的主 要成分。

本次分析建立六味葛藍(lán)降脂片 HPLC 指紋圖譜， 并測(cè)定其中葛根素、大豆苷、大豆苷元、橙黃決明 素、大黃酚的含有量，為完善該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供 依據(jù)。

Agilent 1260 高效液相色譜儀，配置 UV 型紫 外檢測(cè)器; TGL-16G 離心機(jī) ( 上海安亭科學(xué)儀器 廠) ; KQ5200B 超聲清洗器 ( 昆山市超聲儀器有限 公司) ; SQP 電子天平 ［百萬(wàn)分之一，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司］; 超純水 ( 密思博超純水機(jī)制備) 。六味葛藍(lán)降脂片共 10 批 ( 批 號(hào) 20170501、20170601、20170602、20170603、20170701、 20170801、 20170802、 20170803、 20170901、 20171001) ，2 g /片，由廣西中醫(yī)藥大學(xué)制藥廠提 供，原藥材均購(gòu)自廣西玉林市祥生中藥飲片有限責(zé) 任公司，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)制藥廠質(zhì)量保證部專家 鑒定為正品。葛根素對(duì)照品 ( 170109，含 有 量 ＞ 98%，上海融 禾 醫(yī) 藥 科 技 有 限 公 司) ; 大 豆 苷 ( MUST-17092780，含 有 量 99. 46%) 、大 豆 苷 元 ( MUST-17101202，含有量 99. 99%) 、橙黃決明素 ( 111900-201303， 含 有 量 99. 1%) 、 大 黃 酚( MUST-17041310，含 有 量 99. 50%) 對(duì) 照 品 ( 成 都曼思特生物科技有限公司) 。乙腈為色譜純 ( 美 國(guó) Fisher 公司) ; 甲醇、磷酸為分析純 ( 國(guó)藥集團(tuán) 化學(xué)試劑有限公司) ; 水為超純水。

Phenomenex Gemini C18 色 譜 柱 ( 250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ; 流動(dòng)相乙腈 ( A) - 0. 1%磷酸 ( B) ，梯度洗脫( 0 ～ 8 min，15%A; 8 ～ 20 min，30%A; 20 ～ 40 min，55%A; 40 ～ 45 min， 60%A; 45～55 min，70%A; 55 ～ 60 min，85%A) ; 體積流 量 1. 0 mL /min; 檢 測(cè) 波 長(zhǎng) 280 nm; 柱 溫 30 ℃ ; 進(jìn)樣量 10 μL。

精密稱取葛根素、大豆苷、 大豆苷元、橙黃決明素、大黃酚對(duì)照品適量，甲醇 分別制成 1. 210 0、0. 750 0、0. 635 0、0. 570 0、 0. 315 0 mg /mL，取適量置于同一量瓶中，甲醇稀 釋，即得 ( 質(zhì) 量 濃 度 分 別 為 0. 164 1、0. 067 3、 0. 034 4、0. 054 9、0. 028 9 mg /mL) ，置于冰箱中 貯存?zhèn)溆谩?/span>

取本品 20 片，研細(xì)，精密稱 取約 2 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入 20 mL 甲 醇，稱定質(zhì)量，超聲 ( 200 W、40 kHz) 30 min， 冷卻至室溫，甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)， 續(xù)濾液離心，取上清液，即得。

取供試品溶液( 批 號(hào) 20170501) ，在 “2. 1” 項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定 6 次，以 7 號(hào)峰的保留時(shí)間和色譜峰面積為參照，測(cè) 得其 余 11 個(gè)共有峰的相對(duì)保留時(shí)間 ＲSD 在 0. 05% ～0. 24%之間，相對(duì)峰面積 ＲSD 在 0. 89% ～ 2. 0%之間，表明儀器精密度良好，符合相關(guān)要求 和規(guī)定。

取供試品溶液( 批 號(hào) 20170501) ，于 0、2、4、8、12、24 h 在 “2. 1” 項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，以 7 號(hào)峰保留時(shí)間和色譜 峰面積為參照，測(cè)得其余 11 個(gè)共有峰的相對(duì)保留 時(shí)間 ＲSD 在 0. 09% ～ 1. 1%之間，相對(duì)峰面積 ＲSD 在 0. 64% ～2. 0%之間，表明溶液在 24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好，符合相關(guān)要求和規(guī)定。

取本品 ( 批號(hào) 20170501) 約 2 g，按 “2. 2. 2”項(xiàng)下方法制備 6 份供試品溶液， 在 “2. 1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，以 7 號(hào)峰保留 時(shí)間和色譜峰面積為參照，測(cè)得其余 11 個(gè)共有峰 的相對(duì)保留時(shí)間 ＲSD 在 0. 10% ～0. 34%之間，相對(duì) 峰面積 ＲSD 在 1. 2% ～1. 9%之間，表明該方法重復(fù) 性良好，符合相關(guān)要求和規(guī)定。

取 10 批樣品，按 “2. 2. 2”項(xiàng) 下方法制備供試品溶液，在 “2. 1”項(xiàng)色譜條件下 進(jìn)樣測(cè)定，見圖 1，再通過(guò) “中藥指紋圖譜相似度 評(píng)價(jià)軟件” ( 2012. 130723 版) 進(jìn)行分析，平均數(shù) 法生成對(duì)照?qǐng)D譜，多點(diǎn)校正法建立指紋圖譜，見圖 2。共標(biāo)示出 12 個(gè)共有峰，由于 7 號(hào)峰 ( 大豆苷 元) 保留時(shí)間適中，穩(wěn)定性好，峰面積較大，故 選擇其作為參照峰 ( S) ; 10 批樣品相似度均大于 0. 997，表明其質(zhì)量相對(duì)穩(wěn)定，共有成分基本一致， 但含有量上有差異。

3 討論

本次考察供試品溶液制備方法時(shí)，以甲醇、 水、乙醇為提取溶劑，比較了超聲、回流提取，以 及提取時(shí)間、溶劑用量、提取次數(shù)對(duì)含有量測(cè)定的 影響，發(fā)現(xiàn)在取樣量 2 g、甲醇 20 mL、超聲30 min 條件下供試品溶液中 5 種成分總含有量較高，分離 度較好，而且操作簡(jiǎn)便。然后，采用二極管陣列檢 測(cè)器分析不同波長(zhǎng)下色譜圖，發(fā)現(xiàn)在280 nm處各成分較穩(wěn)定，含有量較高，并與其他雜質(zhì)峰達(dá)到良 好的分離效果。