腫節(jié)風(fēng)為金粟 蘭科植物草珊瑚 Sarcandra glabra ( Thunb．) Nakai 的 干 燥 全 草，具有顯著的抗菌、消 炎、抗腫瘤作用，臨床療效確切，已知活性成分有異 嗪皮啶等香豆素類和迷迭香酸等有機(jī)酸類，此外還 有黃酮、倍半萜和揮發(fā)油等。2015 年版 《中國(guó)藥典》 及相關(guān)報(bào)道中有關(guān)腫節(jié)風(fēng)的薄層鑒別大多僅檢測(cè)了 指標(biāo)成分異嗪皮啶，一般均采用傳統(tǒng) TLC 法，在實(shí)際操 作過(guò)程中發(fā)現(xiàn)部分斑點(diǎn)間重疊，不能得到很好的分離，未 能充分反映該藥材信息，從而影響了方法靈敏度，而且 《中國(guó)藥典》采用甲苯展開(kāi)系統(tǒng)，毒性較大。因此，本研 究在 2015 年版 《中國(guó)藥典》基礎(chǔ)上，通過(guò)展開(kāi)條件的優(yōu) 化尋找極性合適、毒性較小的溶劑替代甲苯，探索專屬性 強(qiáng)、靈敏度高的腫節(jié)風(fēng)高效薄層色譜 ( HPTLC)  鑒別 方法。

BP211D 電 子 天 平 ( 十 萬(wàn) 分 之 一，德國(guó)賽多利斯公司) ; KQ3200E 超 聲 波 清 洗 器 ( 昆山市超聲儀器有限公 司) ; 定量毛細(xì)管 ( 美國(guó) Dummond 公司) ; 硅膠 G60 高效 薄層板 ( 德國(guó) Merck 公司) ; 硅膠 G60 薄層板 ( 德國(guó) MN 公司) ; 硅膠 G60 薄層板 ( 山東煙臺(tái)維啟化工產(chǎn)品有限公 司) 。異嗪皮啶 ［薩恩化學(xué)技術(shù) ( 上海) 有限公司，批號(hào) BI180108，含有量 97. 86%］; 迷迭香酸 ( 美國(guó) Sigma 公司， 批號(hào) MKBQ 2631V，含 有 量 98. 74%) ; 腫節(jié)風(fēng)對(duì)照藥材 ( 廣州市藥品檢驗(yàn)所，批號(hào) 121048-201205) 。所用試劑均為 分析純。 13 批藥材 ( S1 產(chǎn)自河北，S2 ～ S3 產(chǎn)自浙江，S4 產(chǎn)自 重慶，S5 產(chǎn)自四川，S6～ S9 產(chǎn)自江西，S10 產(chǎn)自福建，S11 產(chǎn)自廣東，S12～ S13 產(chǎn)自廣西) 均由廣州市藥檢所中藥室顧利紅主任藥師鑒定為正品。

取藥材粉末 2 g，加 50 mL 水超聲 處理 30 min，濾過(guò)，濾液加乙酸乙酯振搖提取 2 次，每次 25 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)?1 mL 甲醇溶解， 即得。

取異嗪皮啶、迷迭香酸 對(duì)照品適量，加甲醇制成每 1 mL 分別含 0. 5 mg 2 種成分的 相應(yīng)溶液。另取對(duì)照藥材粉末 2 g，按 “2. 1”項(xiàng)下方法制 備相應(yīng)溶液。

以異嗪皮啶、迷迭香酸對(duì)照品溶液和 對(duì)照藥材作為參照，將藥材供試品溶液 ( S7) 點(diǎn)于同一塊 硅膠 G60 高效薄層板上，選擇了 3 種展開(kāi)溶劑，置紫外燈 ( 365 nm) 下檢視，。當(dāng)采用 2015 年版 《中國(guó) 藥典》展開(kāi)劑，即甲苯-乙酸乙酯-甲酸 ( 9 ∶ 4 ∶ 1) 時(shí)，薄 層圖譜上半部分成分未能很好展開(kāi); 展開(kāi)劑為環(huán)己烷-乙酸 乙酯-甲酸 ( 7 ∶ 6 ∶ 1) 時(shí)，薄層色譜圖中上半部分成分的 分離有所改善; 當(dāng)展開(kāi)劑為環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸 ( 4 ∶ 5 ∶ 1) 時(shí)，薄層色譜圖中大部分成分均能得到很好分離， 比移值適中，而且環(huán)己烷毒性比甲苯小，故采用環(huán)己烷-乙 酸乙酯-甲酸 ( 4 ∶ 5 ∶ 1) 作為展開(kāi)劑。

參照薄層色譜法 ( 2015 年版 《中 國(guó)藥典》一部附錄Ⅵ B) 試驗(yàn)，吸取供試品、對(duì)照品、對(duì) 照藥材溶液各 2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠 G60 高效薄層板 上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸 ( 4 ∶ 5 ∶ 1) 為展開(kāi)劑，展 開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈 ( 365 nm) 下檢視。結(jié)果供試品色譜在與對(duì)照藥材、對(duì)照品相應(yīng)位置上顯示相同顏色 的熒光斑點(diǎn)。

取藥材供試品溶液 ( S7) 、異嗪皮啶 對(duì)照 品 溶 液 ( 0. 5 mg /mL ) 、 迷迭香酸對(duì)照品溶液 ( 0. 5 mg /mL) 、對(duì)照藥材溶液各 2 μL，在 “2. 4”項(xiàng)條件下展開(kāi)，表明供試品色譜在與對(duì)照藥材、對(duì) 照品相應(yīng)位置上顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)。置氨蒸汽中熏 10 min時(shí)，與對(duì)照品色譜相應(yīng)的斑點(diǎn)變?yōu)辄S綠色，即異嗪 皮啶，表明方法專屬性良好。

考察了用石油醚、甲醇、水超聲提 取后腫節(jié)風(fēng)的薄層色譜圖，結(jié)果表明用有機(jī)溶劑提取后色 譜圖上部分可看到許多紅色熒光斑點(diǎn)，提示色素類成分較 多; 采用水提取處理時(shí)背景較為干凈，雜質(zhì)斑點(diǎn)干擾較少， 故選擇該方法。

前期比較了點(diǎn)樣量 1、2、4、8、10 μL， 發(fā)現(xiàn) 1 μL 時(shí)部分斑點(diǎn)不清晰，而超過(guò) 2 μL 時(shí)色譜峰出現(xiàn) 超載現(xiàn)象，分離度較差，故選擇點(diǎn)樣 2 μL。

比較不同溫度 ( 4、25 ℃ ) 下 的薄層色譜圖，結(jié)果表明溫度對(duì)薄層色譜無(wú)顯著性影響。 然后，比較不同相對(duì)濕度 ( 20%、72%) 下的薄層色譜圖，結(jié)果表明隨著相對(duì)濕度的增大，色譜圖上半部分分離度有 所下降，提示實(shí)際操作過(guò)程中應(yīng)注意控制相對(duì)濕度。

采用高效薄層板的色譜圖中， 異嗪皮啶對(duì)照品在 365 nm 下可檢測(cè)到 2 個(gè)斑點(diǎn)，而在普通 TLC 板中只看到 1 個(gè)，一方面提示該對(duì)照品可能存在雜質(zhì) 或者同分異構(gòu)體，另一方面則提示 HPTLC 法分離度更高。 另外，肉眼觀察比移值較低的斑點(diǎn)面積較大，為進(jìn)一步確 證，將薄層板置氨蒸汽中熏 10 min，再在 365 nm 下檢視， 發(fā)現(xiàn)對(duì)照品色譜相應(yīng)的斑點(diǎn)變?yōu)辄S綠色，即異嗪皮啶，從 而確證比移值較低的斑點(diǎn)為異嗪皮啶。

HPTLC 法采用更細(xì)、更均勻的改性 硅膠和纖維素作為固定相，其分離度和靈敏度明顯優(yōu)于普 通 TLC 法。該方法主斑點(diǎn)清晰，易于檢出，專屬性強(qiáng)， 靈敏度高，穩(wěn)定性好，同時(shí)檢測(cè)了指標(biāo)成分異嗪皮啶和抗 炎活性成分迷迭香酸，能更全面地反映腫節(jié)風(fēng)質(zhì)量。