沒藥為橄欖科（Burevaceae）沒藥屬（Commiphora） 植物地丁樹 Commiphora myrrha Egnl. 或哈地丁樹 Commiphora molmol Egnl. 的 干 燥 樹 脂，分 為 天 然 沒 藥和膠質(zhì)沒藥，主產(chǎn)于索馬里與埃塞俄比亞 ，其質(zhì) 量標(biāo)準(zhǔn)收載于《中華人民共和國藥典》2015 年版一 部 。沒藥藥性辛、苦，平，歸心、肝、脾經(jīng)，有特異的 香氣，在中國以及印度等地具有悠久的用藥歷史，具 有活血、消腫、止痛的功效，主治瘀血心腹諸痛、跌撲 傷痛等 。

安 捷 倫 公 司 Agilent 1260 型高效液相色譜儀，包括 G1311C 四元泵、在線脫氣機(jī)、G1315D DAD、G1329B 自 動(dòng) 進(jìn) 樣 器、LC1260 色 譜 工 作 站、 G1316A 柱溫箱；賽多利斯公司 Sartorius BT25S 電子 天平（十萬分之一）、Sartorius BSA124S-CW 電子天 平（萬分之一）；昆山市超聲儀器公司 KQ-500DE 型 數(shù)控超聲波清洗器。

化合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的對(duì)照品均為本課題 組自制，通過 1H-NMR、13C-NMR、MS 等手段確證 了其結(jié)構(gòu)，純度經(jīng) HPLC 法檢測均 >98%（面積歸一 法）。乙腈（Sigma 公司）為色譜純，水為 Milli-Q 超 純水，甲醇及乙醇（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）、磷 酸（西隴科學(xué)股份有限公司）為分析純。6 批沒藥藥 材均購自于藥材市場，由周國平主任藥師鑒定為地丁 樹 Commiphora myrrha Engl. 的干燥樹脂。

精密稱取化合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ 的對(duì)照品適量，加甲醇制得質(zhì)量濃度分別為 0.018 4、 0.029 0 和 0.025 8 mg·mL-1 的混合溶液，即得。

取沒藥藥材粉末（過 3 號(hào)篩）約 0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇 25 mL，密塞，稱量，超聲（功率 500 W，頻率 40 kHz）處 理 0.5 h，放冷，再稱量，用甲醇補(bǔ)足減失的量，搖勻， 過 0.45 μm 微孔濾膜，即得。

采用資生堂 CAPCELL PAK C18 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫 30 ℃，以乙腈（A）-0.1% 磷酸水溶 液（B）為流動(dòng)相，梯度洗脫（0~40 min，41%B；41~60 min，44%B），流速 1.0 mL·min-1，檢測波長 210 nm，進(jìn)樣 量 10 μL；在上述色譜條件下，樣品色譜中與各對(duì)照品對(duì) 應(yīng)的吸收峰的理論板數(shù)均不低于 3 000，色譜圖見圖 1。

4 方法學(xué)考察

4.1　線性關(guān)系考察　

精密吸取“2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照 品溶液 1、2、5、10、15、25，分別按“3”項(xiàng)下色譜條件 進(jìn)樣分析，以進(jìn)樣量 X（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積 Y 為縱 坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行回歸計(jì)算，得 3 個(gè)成分的 線性回歸方程，結(jié)果見表 1。

4.2　精密度試驗(yàn)　

精密吸取混合對(duì)照品溶液 5 μL， 按“3”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣 6 次，依次測定峰面 積，結(jié)果化合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ峰面積的 RSD（n=6）分別0.35%、0.17%、0.11%，表明儀器精密度良好。

精密吸取供試品溶液 10 μL，按 “3”項(xiàng)下色譜條件，于 0、1、2、4、8、12、24 h 分別進(jìn) 樣測定，結(jié)果化合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ峰面積的 RSD（n=7） 分別為 0.62%、0.70%、0.69%，表 明 供 試 品 溶 液 在 24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

取同一批沒藥藥材粉末（過 3 號(hào) 篩）6 份，各約 0.2 g，精密稱定，按“2.2”項(xiàng)下方法制 備供試品溶液，并按“3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定， 化合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的平均含量（n=6）分別為 0.791、 1.430、1.471 mg·g -1，RSD 分別為 0.91%、1.1%、 0.76%。

檢測波長的選擇　應(yīng)用 DAD 檢測器在 190~400 nm 范圍內(nèi)對(duì)化合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ進(jìn)行光譜掃描；結(jié)果 表明，在 210 nm 波長附近 3 個(gè)成分吸光系數(shù)均最大， 干擾少且穩(wěn)定，故選擇 210 nm 作為檢測波長。供試品溶液制備方法的考察　考察了回流提取 法和超聲提取法對(duì)化合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ含量測定的影 響，結(jié)果顯示超聲提取法方便且能提取完全，故選擇 超聲提取法。提取溶劑考察了乙腈溶液、甲醇溶液、 乙醇溶液，結(jié)果顯示甲醇溶液提取時(shí)化合物Ⅰ、Ⅱ和 Ⅲ含量均較高。提取時(shí)間考察了 0.25、0.5、1.0 h，結(jié) 果顯示 0.5 h 可提取完全。提取體積考察了 15、25、 50 mL，結(jié)果顯示無明顯差別，故將提取體積定為25 mL?！×鲃?dòng)相的確定　考察了乙腈 - 水、乙腈 -0.1% 磷 酸 水 溶 液、甲 醇 -0.1% 磷 酸 水 溶 液、甲 醇 - 水 4 個(gè)溶劑系統(tǒng)，結(jié)果顯示以乙腈 -0.1% 磷酸水溶液為 流動(dòng)相，所得色譜峰峰形較好，分離效果最佳；同時(shí) 考察了采用 41% 乙 腈 -0.1% 磷 酸 水 溶 液、42% 乙 腈 -0.1% 磷酸水溶液以及本實(shí)驗(yàn)的梯度洗脫，結(jié)果 以 41% 乙腈 -0.1% 磷酸水溶液為流動(dòng)相時(shí)化合物Ⅲ 出峰時(shí)間太晚，以 42% 乙腈 -0.1% 磷酸水溶液為流 動(dòng)相時(shí)化合物Ⅰ將雜質(zhì)峰包進(jìn)去，故采用本實(shí)驗(yàn)的梯 度洗脫。本實(shí)驗(yàn)對(duì) 6 批不同產(chǎn)地沒藥藥材中化合 物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ 3 個(gè)成分的含量進(jìn)行測定，結(jié)果顯示不 同樣品含量差異較大。本文建立了沒藥中 3 個(gè)主要 倍半萜成分的 HPLC 含量測定方法，色譜峰分離效果 較好，基線較平，重現(xiàn)性較好，簡便可靠，可為進(jìn)一步 完善沒藥藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法提供參考依據(jù)。